*草乌AconitumvilmorinianumKom.为毛茛科（Ranunculaceae）乌头属aconitumKom.多年生草本植物，又称草乌、藤草乌、大草乌、昆明堵喇、昆明乌头等，主要分布于云南中部和北部、四川南部和贵州西部[1]。其味苦辛麻，性温，具有祛风散寒、活血止痛的功效，临床主要用于医治跌打损伤、风湿关节疼痛、手足厥冷等[2-3]，目前已收入年版《云南省药品标准》。乌头类中药材*性较强，用药安全范围窄，主要作用于心脏，产生异常兴奋，可致各型心律失常[4]，大多经炮制后入药。经过炮制，乌头类中药材中的双酯型乌头碱会水解成*性较小的单酯型乌头碱[5]，但与大多数乌头类中药材不同，*草乌中主要有效成分及*性成分为滇乌碱[6-7]，经过炮制，滇乌碱会水解成8-去 滇乌碱[8]，目前鲜有*草乌炮制前后滇乌碱和8-去 滇乌碱含量测定的相关文献报道，而*草乌炮制后是否仍具有心脏*性，尚未见相关文献报道。本研究通过对*草乌炮制前后的生物碱含量变化及心脏*性实验研究，探讨*草乌炮制前后对心脏*性的影响，为*草乌临床用药的安全性提供实验依据。

1材料

1.1药品与试剂

*草乌，购于云南省红河州泸西县，经广东药科大学中药学院刘基柱副教授鉴定为毛茛科乌头属植物*草乌AconitumvilmorinianumKom.的干燥块根，批号、、；制*草乌，炮制方法为《云南省中药饮片炮制规范》（年）中的炙草乌“煮蒸炙”法，批号、、（分别对应的生品批号为、、）；滇乌碱对照品（质量分数98.96%，批号MUST-）、8-去 滇乌碱对照品（质量分数99.21%，批号MUST-），均购自成都曼思特生物科技有限公司；乙腈为色谱纯，其他化学试剂均为分析纯。

1.2动物

SPF级动物房饲养SD大鼠只，雌雄各半，日龄（70～90d），体质量（±20）g，由广东省医学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（粤）-，质量合格证编号44007049984。

1.3仪器

BL-生物信号采集处理系统，成都泰盟软件有限公司；WatersACQUITYUPLCH-Class超高效液相色谱仪（含QSM四元溶剂管理器、SM-FTN样品管理器、PDA二极管阵列检测器及Empower3工作站，美国Waters公司）；XBridgeTMBEHC18柱（mm×4.6mm，2.5μm），美国Waters公司；BA生物显微镜，厦门麦克奥迪医疗诊断系统有限公司。

2方法与结果

2.1*草乌生品及炮制品中滇乌碱和8-去 滇乌碱含量测定

2.1.1对照品溶液的制备分别取滇乌碱和8-去 滇乌碱对照品适量，精密称定，加 制成质量浓度为0.mg/mL的滇乌碱对照品溶液和质量浓度为0.mg/mL的8-去 滇乌碱对照品溶液。

2.1.2供试品溶液的制备精密称取*草乌及制*草乌粉末（过3号筛）各2.0g，加入3mL氨水润湿，精密加入50mL异 - （1∶1）混合溶液，35℃超声提取30min，滤过，精密量取滤液25mL，35℃减压回收至干。残渣用 定容至10mL，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得[9]。

2.1.3色谱条件色谱柱为XBridgeTMBEHC18柱（mm×4.6mm，2.5μm），流动相为乙腈-40mmol/L 钾［ 调pH（3.0±0.1）］[10]，梯度洗脱：0～5min，15%～26%乙腈；5～7min，26%～35%乙腈；7～10min，35%乙腈；10～12min，35%～75%乙腈；12～15min，75%～15%乙腈[10]；柱温为35℃；体积流量为0.6mL/min，进样量为10μL，检测波长为nm。

2.1.4检测限考察分别精密吸取滇乌碱和8-去 滇乌碱对照品备用液进行倍比稀释后，在“2.1.3”项下色谱条件进样，在S/N＝3的条件下，测得滇乌碱和8-去 滇乌碱的质量浓度分别为0.、0.μg/mL，表明滇乌碱和8-去 滇乌碱的检测限分别为0.、0.μg/mL。

2.1.5线性关系考察分别精密吸取滇乌碱和8-去 滇乌碱对照品备用液2、4、6、8、10μL，在“2.1.3”项下色谱条件进样，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y），对照品溶液进样量为横坐标（X），绘制标准曲线，得到滇乌碱和8-去 滇乌碱的回归方程分别为Y＝X－（r2＝0.），Y＝X－.1（r2＝0.）。

2.1.6精密度考察分别取*草乌（批号）同一供试品溶液、制*草乌（批号）同一供试品溶液，在“2.1.3”项下色谱条件各连续进样6次，测得滇乌碱和8-去 滇乌碱峰面积RSD分别为0.20%和0.45%，表明仪器精密度良好。

2.1.7重复性考察分别精密称取*草乌（批号）和制*草乌（批号）各2.0g，各平行6份样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1.3”项下色谱条件进样测定，结果滇乌碱和8-去 滇乌碱的质量分数的RSD分别为1.35%和0.83%，表明方法重复性良好。

2.1.8稳定性考察分别精密称取*草乌（批号）和制*草乌（批号）各2.0g，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1.3”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8、12、24h进样，进样体积10μL，以峰面积计算，测得滇乌碱和8-去 滇乌碱峰面积RSD分别为0.51%和0.30%，表明样品在24h内稳定。

2.1.9加样回收率考察精密称取*草乌（批号）和制*草乌（批号）各约1.0g，分别平行6份样品，*草乌供试品中精密加入滇乌碱对照品.56μg，制*草乌供试品中精密加入8-去 滇乌碱对照品.6μg，按照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1.3”项下色谱条件测定滇乌碱和8-去 滇乌碱峰面积，计算平均回收率，结果滇乌碱和8-去 滇乌碱平均加样回收率分别为为99.26%和97.39%，RSD分别为2.32%和3.49%。

2.1.10样品测定结果分别精密称取*草乌和制*草乌粉末各2.0g，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1.3”项下色谱条件进样，分别测定3批*草乌和制*草乌中的滇乌碱和8-去 滇乌碱，色谱图见图1，测定结果见表1。UPLC法测定*草乌中的滇乌碱质量分数平均值为.96μg/g，8-去 滇乌碱低于检测限；制*草乌中8-去 滇乌碱的质量分数平均值为.47μg/g，滇乌碱低于检测限。

2.2统计学处理

所有数据用表示，采用统计软件SPSS21.0进行单因素方差分析。

2.3*草乌和制*草乌的制备

分别取*草乌和制*草乌粉末（过3号筛）20g，加入20mL0.5%CMC-Na溶解，备用。

2.4急性*性实验

2.4.1急性*性预试验取禁食12h大鼠，按体质量随机分为3组，分别为对照组、*草乌组和制*草乌组，每组3只，雌雄兼用。药物组按10mL/kgig给药1次，对照组ig等体积的生理盐水。根据大鼠死亡情况调整给药浓度，分别找出各样品最小全致死量（Dm）及最小全活量（Dn）和相应的剂量组间距（r）值。若经 给药体积和 给药浓度ig给药后，大鼠仍无死亡，则进行 耐受量（MTD）或 给药量测定[11]。

2.4.2急性*性正式实验① 给药量测定：预试验结果表明，制*草乌的*性较小，无法测定大鼠的半数致死量（LD50）和MTD，故进行 给药量测定。取大鼠12只，雌雄各半，在预试验的基础上确定给药剂量范围。上、下午各ig给予制*草乌（生药24g/kg）1次，记录大鼠精神状态以及*性反应情况。②半数致死量测定：预试验结果表明，*草乌的Dn和Dm分别为生药2.2g/kg和7.64g/kg。取大鼠50只，按体质量和性别随机分组，每组10只。依据预试验结果，将*草乌按r值为1∶0.74分为5个剂量组（生药2.30、3.10、4.20、5.68、7.64g/kg），各组均ig给药，观察大鼠*性反应的症状，统计大鼠死亡率，采用Bliss法计算LD50以及LD50的95%可信限。

2.4.3急性*性实验结果给药8min后，制*草乌组大鼠出现不同程度活动量减少、呼吸减慢，运动不协调症状，制*草乌在 给药剂量下并未出现动物死亡情况， 给药剂量为生药24.0g/kg。

给药3min后，*草乌组大鼠均开始出现不同程度的出汗、腹泻、运动不协调症状；给药7min后出现腹式呼吸、痉挛、抽搐，直至死亡。*草乌生药2.30、3.10、4.20、5.68、7.64g/kg各组的大鼠死亡数分别为0、3、5、8、9，通过Bliss法计算*草乌的LD50为生药4.20g/kg，其LD50的95%可信限为生药3.51～5.09g/kg。

2.5*草乌炮制前后对大鼠心脏*性的影响

2.5.1*草乌炮制前后对大鼠心电图的影响取大鼠36只，雌雄各半，按体质量随机分为3组：对照组、*草乌组（生药0.21g/kg）和制*草乌组（生药0.21g/kg），给药剂量依据为1/20LD50，给药体积为10mL/kg，每组12只。大鼠每天ig给药1次，连续给药14d，末次给药1h后，ip10%水合氯醛（3mL/kg）进行麻醉，数分钟后，动物仰面固定，使用生物信号采集系统，正向电级插入右上肢，负向电级插入左下肢，底线接右下肢，记录各组大鼠不同时间点（15、30、45、60min）II导联心电图，记录P波、T波、QT间期、PR间期、QRS间期和心率变化情况[12]，QT间期受心率影响，因此分析时需要用心率校正为QTc间期，选择使用Bazett公式QTc＝QT/RR1/2校正QT间期，RR为标准化的心率值，根据60除以心率得到。

*草乌连续给药14d，观察各组麻醉大鼠15、30、45、60minII导联心电图变化。与对照组相比，*草乌组P波幅度显著升高（P＜0.05），T波幅度显著性降低（P＜0.05），QRS波时间在30min和45min显著延长（P＜0.05），QTc间期显著减小（P＜0.05），心率明显减慢（P＜0.01）；制*草乌组各项指标均无明显差异（P＞0.05）；与制*草乌组相比，*草乌组P波幅度显著升高（P＜0.05），T波幅度显著降低（P＜0.05），QRS波时间在30min和45min显著延长（P＜0.05），QTc间期显著减小（P＜0.05），心率明显减慢（P＜0.01）。结果见表2～5。

2.5.2*草乌炮制前后对大鼠血清生化指标和心脏指数的影响按“2.5.1”方法分组给药，末次给药1h后，大鼠麻醉后经腹主动脉采血，分离血清（4℃，r/min，离心10min），全自动生化分析仪检测血清中肌酸激酶（CK）、 脱氢酶（LDH水平），并立即取出心脏，用冷生理盐水冲洗心脏表面的血污，滤纸吸干表面水分，称量心脏湿质量，计算心脏指数（心脏指数＝心脏质量/体质量）[13]。

大鼠连续给药14d后，与对照组相比，*草乌组大鼠血清CK和LDH水平均明显升高（P＜0.05），制*草乌组大鼠血清LDH和CK水平虽有上升趋势，但只有LDH水平差异显著（P＜0.05）；与制*草乌组相比，*草乌组大鼠血清的CK和LDH水平明显升高（P＜0.05）；与对照组相比，*草乌组和制*草乌组大鼠心脏指数差异均不显著（P＞0.05）。结果见表6。

2.5.3*草乌炮制前后对心脏病理组织形态学的影响取部分心脏组织，用4%中性 固定，常规石蜡包埋、切片（5μm），HE染色，生物显微镜下观察[14]。结果可见，对照组大鼠心肌纤维排列整齐，紧密，肌丝粗细均匀，间质个别小血管充血，未见炎细胞浸润；*草乌组大鼠心肌纤维排列紊乱，心肌纤维之间间隙明显增宽，肌丝粗细不等，肌浆融合，部分区域肌纤维溶解、萎缩，间质血管扩张，充血伴少量出血，并见散在炎细胞浸润；制*草乌组大鼠心肌纤维排列较整齐，心肌纤维间隙和肌丝粗细较均匀，间质小血管充血，仅见个别炎细胞浸润。结果见图2。

3讨论

目前对*草乌的化学成分和心脏*性作用方面的研究还不够深入，*草乌炮制前后生物碱的含量变化及其对心脏*性的影响均未阐明，这些都影响了*草乌的临床用药安全。现代*理学研究表明8-去 基滇乌碱比滇乌碱的急性*性小[15]。含量测定结果表明，生品中的滇乌碱含量为.96μg/g，8-去 滇乌碱未检出，炮制品中的8-去 滇乌碱含量为.47μg/g，滇乌碱未检出。经过炮制后，*草乌滇乌碱含量降低，8-去 滇乌碱含量升高，因此推测*草乌炮制后*性降低可能与*草乌炮制前后成分变化有关。

临床上的心脏*性评价主要有功能学和形态学两方面。功能学主要有心电图，心电向量图、心阻抗血流图等，形态学主要包括心肌组织形态学及心肌细胞超微结构观察[16]。本研究从心电图，CK，LDH血清水平及心肌组织病理切片3个方面来观察*草乌炮制前后连续给药14d对大鼠心脏*性的影响。实验结果显示，末次给药1h后连续观察60min，在相同剂量情况下，与对照组相比，生品组心电图心率明显下降，先后出现室性早搏、室性二联律和室颤等心律失常现象，炮制品组心率无显著性差异，生品组血清CK和LDH水平均高于对照组和炮制品组，炮制品组只有LDH水平高于对照组（P＜0.05），同时，心肌组织病理形态学结果显示，生品组有明显病理改变，部分区域肌纤维溶解、萎缩，间质血管扩张，并见散在炎细胞浸润，炮制品组未见明显的心肌损伤病理改变，以上结果表明生品的心脏*性较大，经过炮制，*草乌滇乌碱含量降低，8-去 滇乌碱含量升高，*草乌炮制前后的心脏*性变化可能与滇乌碱及8-去 基滇乌碱的含量变化有关。

乌头类药物中*事件时有发生[17]，本研究通过对*草乌炮制前后的生物碱含量测定和心脏*性效应的实验研究，发现炮制对*草乌具有减*作用，本研究对*草乌临床安全用药具有一定参考价值。

参考文献（略）

来源：黎虽宇，刘小赟，唐春萍，陈艳芬，王丽苹，温玉莹，林小中，杨超燕，沈志滨.*草乌炮制前后生物碱含量及心脏*性差异研究[J].中草药,,49(23):-.

赞赏

长按







































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